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sexta-feira, 6 de dezembro de 2019

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Jornal de Saúde

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Toxicidade e avaliação bioquímica seletiva de quercetina, ácido gálico e curcumina em peixe-zebra


 Nos últimos anos, vários resultados de pesquisa foram estabelecidos em vários compostos naturais que demonstraram ter antioxidante benéfico e outras atividades biológicas.  O mecanismo de defesa antioxidante desempenha um papel vital no combate a várias doenças, principalmente devido ao estresse oxidativo. 

 No entanto, vários modelos foram utilizados para identificar suas bioatividades usando esses compostos (quercetina, ácido gálico e curcumina).  Seu nível de toxicidade também deve ser explorado para determinar os níveis de limiar no uso desses compostos.  Neste estudo, investigamos a concentração letal desses compostos e anormalidades, alterações bioquímicas e morfológicas no embrião de peixe-zebra (Danio rerio).  O nível de toxicidade foi avaliado calculando o LD50 nos estágios embrionários às 24, 48 e 72h.  Parâmetros antioxidantes como superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa (GSH) e ensaios biológicos como peroxidação lipídica e estimativa de proteínas foram realizados.  Avaliações microscópicas também foram observadas para descobrir anormalidades morfológicas.  No entanto, esses compostos derivados naturalmente têm seu papel protetor e curativo em muitas complicações de saúde.  A partir dos ensaios acima, estamos estudando o efeito dos medicamentos de maneira bioquímica e molecular no organismo modelo de peixe-zebra.

 Palavras-chave peixe-zebra;  Danio rerio;  quercetina;  ácido gálico;  curcumina;  toxicidade
 1969

 INTRODUÇÃO
 O interesse crescente por vários compostos derivados de plantas, como quercetina, ácido gálico e curcumina, tem sido observado nas últimas duas décadas devido aos vários benefícios à saúde que esses compostos possuem.  No entanto, o efeito tóxico de tais compostos deve ser avaliado com outros modelos animais alternativos, como Danio rerio (peixe-zebra), Artemia salina (camarão em salmoura), Caenorhabditis elegans (lombriga), Drosophila melanogaster (mosca da fruta), Galleria mellonella (mariposa-maior)  ) e assim por diante.

 Quercetina é derivada da palavra latina quercous, que significa “carvalho”. O nome é usado desde 1857 e é derivado do quercetum (floresta de carvalhos) após “Quercus”. Quercetina, ou seja, 3,3 ′, 4 ′, 5  , 7-penta-hidroxiflavona, que é um flavonóide.  Frutas como maçã, bagas, etc., e alguns vegetais, como cebola, brócolis, etc., são abundantes em quercetina.2-4) Existem formas livres e limitadas de quercetina em combinação com carboidratos e álcoois nas plantas.  As principais funções da quercetina incluem sua capacidade de agir como um agente antioxidante, anti-inflamatório, antibacteriano e antiviral, útil no tratamento de várias condições, sendo a obesidade e as doenças cardiovasculares duas delas.5–7) No entanto, um estudo recente afirma que  a dosagem mais alta de quercetina para exposição a longo prazo levou a toxicidade e carcinogenicidade quando administrada em ratos machos e fêmeas.8) A administração oral de quercetina mostrou LD50 a 161mg / kg em ratos e
 † Endereço atual: Biocon Limited;  Cidade eletrônica, Bengaluru – 560 100, Índia.

 *Para quem a correspondência deve ser endereçada.  e-mail: godwinj@vit.ac.in
 159 mg / kg no rato.  Administração subcutânea LD50 a 97mg / kg e administração intravenosa de aproximadamente 18mg / kg no modelo de camundongo.

 O ácido gálico é um composto de polifenol que é quimicamente denominado ácido 3,4,5-trihidroxibenzóico. Sabe-se que compostos polifenólicos elucidam propriedades antioxidantes, além de anticâncer, antibacteriano, antiviral, anti-úlcera, anticolesterol e vários outros.10-12) A capacidade de eliminação de radicais deste composto é de importância farmacológica.13) O ácido gálico mostrou  muito potencial como agente terapêutico e preventivo para doenças que envolvem estresse oxidativo, como doenças cardiovasculares, distúrbio neurodegenerativo, câncer e até envelhecimento.  
 O ácido gálico é o componente ativo do vinho tinto, chá verde e frutas, responsável pela redução da doença arterial coronariana (DAC) e da trombose arterial.14,15) O ácido gálico também tem sido relatado para melhorar a tolerância à glicose, o colesterol total,  concentração de triglicerídeos e colesterol de lipoproteína de baixa densidade (LDL) em animais obesos induzidos por dieta.16,17) Por outro lado, a anormalidade baseada na dose foi relatada em ratos F344 em ambos os sexos, o que inclui redução da concentração de hemoglobina, hematócrito e  contagem de glóbulos vermelhos e aumento de reticulócitos.  Todos esses resultados indicaram que 5% do ácido gálico era tóxico, o que leva à anemia hemolítica e à hipertrofia hepática.18) A administração intravenosa e intraperitoneal de ácido gálico mostrou LD50 no camundongo a 320mg / kg e 4300mg / kg, respectivamente.  A administração oral mostrou LD50 a 5g / kg no modelo de coelho.

 A curcumina é um polifenol derivado da planta Curcuma longa.  Quimicamente, é denominado 1,6-heptadieno-3,5-diona-1,7-bis (4-hidroxi-3-metoxifenil) - (1E, 6E) .19) A curcumina exibe
   © 2019 Sociedade Farmacêutica do Japão

 1970 Biol.  Pharm.  Touro.  Vol.  42, n ° 12 (2019)
 forte atividade antioxidante comparável à das vitaminas C e E. Foi demonstrado ser um potente limpador de uma variedade de espécies reativas de oxigênio, incluindo radicais ânion superóxido, radicais hidroxila e radicais dióxido de nitrogênio, que geralmente deterioram as biomoléculas, como proteínas,  lipídios e ácidos nucléicos, especialmente danos ao DNA.20,21) A unidade hidroxifenil na curcumina demonstrou ser crucial para sua atividade anti-inflamatória.22) A administração intraperitoneal de curcumina mostrou LD50 no camundongo a 1500mg / kg.9)

 O peixe-zebra (Danio rerio), um peixe de água doce de tamanho pequeno usado amplamente como um poderoso organismo modelo para o estudo da biologia vertebrada, sendo bem adequado para análises de desenvolvimento e genética é um organismo modelo em muitos campos como genética,  biologia do desenvolvimento, toxicologia, farmacologia e assim por diante.23) O genoma do peixe-zebra é aproximadamente 71% homólogo do de um humano e 84% dos genes associados a doenças humanas têm uma contrapartida de peixe-zebra.24) Outras vantagens de usar o peixe-zebra como modelo  como é pequeno e fácil de manter e reproduzir em menos espaço, também é opticamente transparente, o que facilita a observação das mudanças que ocorrem.  Os produtos químicos para medicamentos podem ser facilmente fornecidos por adição à água;  a possibilidade de usar amostras de tamanhos grandes;  tempo de geração curto.  Institutos Nacionais de Saúde trazendo esse sistema modelo para todo o seu potencial para o estudo da biologia, fisiologia e doenças humanas dos vertebrados.25,1)

 Este estudo foi desenvolvido para investigar várias alterações bioquímicas na exposição à quercetina, ácido gálico e curcumina no peixe-zebra (Danio rerio).  No entanto, esses compostos foram avaliados quanto à toxicidade em outros modelos, como ratos Wistar, camundongo e coelho.  É o primeiro relato de quercetina e ácido gálico na avaliação da toxicidade do desenvolvimento em modelo de embrião de peixe-zebra;  como o uso do peixe-zebra como modelo animal experimental tem muitas vantagens, o peixe-zebra possui alta fecundidade.  Verifica-se que a eclosão dos ovos e a organogênese ocorrem rapidamente.  

Ao contrário de outros modelos de mamíferos, eles se desenvolvem fora do útero, o que torna possível criá-los em placas de Petri ou em placas de vários poços contendo água.  Eles podem ser usados ​​para experimentos larvais a partir do terceiro dia após a fertilização (dpf).  Os embriões também são transparentes.26) Para padronizar a toxicidade de medicamentos nesse modelo, foi calculada a dose letal de cerca de cinquenta por cento (LD50) e estimou-se seu papel no estresse oxidativo, reduzindo o nível de antioxidantes.  Estudos de enzimas antioxidantes, medindo biomarcadores, como a peróxido dismutase (SOD), catalase (CAT), peroxidase lipídica, glutationa (GSH) e ensaios biológicos, como peroxidação lipídica, estimativa de proteínas foram analisados.

 MATERIAIS E MÉTODOS
 Produtos químicos Os compostos de fármaco para avaliação da toxicidade (Quercetina, ácido gálico e curcumina) foram adquiridos à Sigma-Aldrich.  Dimetilsulfóxido (DMSO) de Himedia, Índia.  O meio embrionário (meio E3) foi preparado e as abordagens de toxicidade foram seguidas usando métodos padrão das diretrizes 236 da OCDE.

 Criação de peixes e embriões de peixes Os peixes-zebra do tipo selvagem (Danio rerio) foram obtidos da Universidade Madurai Kamaraj, Madurai, Tamilnadu.  Após a aclimatação, o melhoramento foi realizado em nosso laboratório.  Os peixes foram mantidos para desova no início da manhã.  Em seguida, todos os embriões foram coletados e lavados completamente com meio E3 e foram transferido para uma placa de Petri onde os embriões saudáveis ​​e os mortos foram separados.  Os embriões saudáveis ​​foram selecionados às 6h pós-fertilização (hpf), observando-os sob um microscópio.  A alimentação não é necessária para a 7d após a fertilização, pois a nutrição necessária é recebida do saco vitelino.27).

 Exposição de embriões e larvas de peixe-zebra Os ovos fertilizados saudáveis ​​às 6h após a fertilização (hpf) foram transferidos para uma placa de cultura de células de 24 poços.  Cerca de 10 embriões foram coletados em cada poço com diferentes concentrações da solução do medicamento (10, 50, 100, 200 e 500μg / mL).  O tratamento com cada solução foi realizado em triplicatas.  Os embriões com soluções medicamentosas foram incubados a 28 ± 1 ° C por diferentes períodos de tempo (24, 48 e 72h).  Em cada ponto de verificação, os embriões mortos foram contados para o cálculo da taxa de mortalidade (%) e os embriões vivos / larvas chocadas foram usados ​​para o experimento posterior.
 Teste da superóxido dismutase (SOD) A atividade da SOD foi medida pela capacidade da enzima de inibir a redução fotoquímica do cloreto de nitroblue-tetrazólio (NBT).  Uma mistura de reação (consistindo em tampão fosfato 50mM (pH 7,8), ácido etilenodiaminotetraacético 100μM (EDTA), metionina 130mM, NBT 750μM, riboflavina 20μM e riboflavina 20μM e sobrenadante enzimático 50μL) foi misturada e iluminada com a ajuda de um fluorescente de 4000 lx  lâmpada por 15 min.  Após a iluminação, a absorbância foi medida em 560 nm usando um espectrofotômetro visível no UV.28)

 CAT A atividade do CAT é determinada com a ajuda do espectrofotômetro visível no UV.  O tampão fosfato contendo 2 mM de H2O2 é adicionado em uma cubeta experimental à qual o extrato enzimático é adicionado e bem misturado.  A atividade da enzima é determinada descobrindo a absorvância usando a absorbância visível do espectrofotômetro UV Shimadzu a 240 nm em um espectrofotômetro.  A absorvância diminui quando o peróxido de hidrogênio é degradado pela enzima CAT e sua atividade pode ser determinada.28)

 GSH reduzido GSH é analisado pelo procedimento de Moron et al.29) A conversão de GSH oxidado em GSH reduzido é catalisada pela GSH redutase com a ajuda de nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato (NADPH) como substrato em que a quantidade de NADPH representa enzima  atividade.  Para prosseguir com o experimento, foram adotados padrões GSH de diferentes concentrações (100, 200, 500 e 1000μg / mL) aos quais foram adicionados soro fisiológico tamponado com fosfato (PBS) e ácido 5,5'-ditiobis-2-nitrobenzóico (DTNB)  para fazer o volume total de 3 mL.  Após incubação por 10 min, a absorvância foi obtida utilizando espectrofotômetro a 412 nm.  Uma curva padrão foi plotada usando a absorvância obtida dos padrões GSH e, usando essa curva, o GSH presente na amostra foi determinado no software GraphPad Prism versão 5.01.29)

 Ensaio de peroxidação lipídica A peroxidação lipídica é o ensaio biológico no qual a concentração de malondialdeído (MDA) é medida.  MDA é o produto final formado a partir dos lipídios.  Essa atividade do MDA pode ser determinada com a ajuda do espectrofotômetro visível no UV.  Após 72 horas, poucas amostras dos embriões foram lisadas no tampão de lise e foram adicionadas com TCA ao homogenato lisado e, em seguida, centrifugação a 2500 rpm por 10 min.  O sobrenadante foi coletado ao qual o ácido tiobarbitúrico (TBA) foi adicionado e mantido em banho-maria a 95 ° C por 10 min.  O butanol foi adicionado ao sobrenadante seguido de centrifugação.  A camada de butanol foi separada e a DO foi medida em

 Vol.  42, n ° 12 (2019) Biol.  Pharm.  Touro.  1971
  Fig. 1. LD50 obtido em diferentes concentrações dos compostos selecionados (a - quercetina; b - ácido gálico ec - curcumina)
 532 nm.30)

 Estimativa de proteínas A quantidade de proteína nas 72h
 embriões tratados com medicamentos foram estimados usando o método de Bradford.  Cerca de 20 μL de homogeneizado de embrião tratado com fármaco foram adicionados com 80 μL de água destilada e 900 μL de reagente Bradford foram adicionados a ela e foram incubados por 5 minutos no escuro e verificados quanto à absorvância a 595 nm.  A estimativa foi determinada usando-se slop padrão com a albumina sérica da videira como a proteína padrão variando de 0, 5, 10, 25, 50 e 100μg / mL.31)

 Análise estatística Todos os dados foram feitos em triplicado e a porcentagem de mortalidade foi calculada usando o prisma Graph pad versão 5.01.  Os dados são mencionados aqui como uma média ± desvio padrão (S.D.).  A ANOVA unidirecional foi realizada para significância estatística usando o teste de comparação múltipla de Dunnett com p <0,05.

 RESULTADOS E DISCUSSÃO

 Efeito tóxico de compostos seletivos no embrião de peixe-zebra Foi relatado que a curcumina tem efeitos embriotóxicos e teratogênicos no desenvolvimento do peixe-zebra.  A partir da exposição da curcumina pelo período de 24h, os valores de LD50 foram relatados como 7,5mM para embriões e 5mM para larvas, respectivamente.32) No caso do ácido gálico, foi relatado anteriormente como o LD50 em peixes-zebra adultos  na dose de 100 mg / L.33) Este estudo é para avaliar a mortalidade usando quercetina, ácido gálico e curcumina em embrião de peixe-zebra para determinar seus valores de LD50.  O tratamento dos embriões começou das 6 às 72hpf.  Em nosso estudo, os resultados foram apresentados graficamente na Figura 1 como a, bec para quercetina, ácido gálico e curcumina, respectivamente.  Os valores de LD50 para quercetina, ácido gálico e curcumina são 484, 304 e 135μg / mL, respectivamente.  O estudo anterior mostrou comparativamente o efeito tóxico da cominho em peixe-zebra, mesmo em menor concentração.32) A partir disso, podemos ver que a quercetina tem a menor toxicidade e a curcumina mais tóxica dos três compostos.

 Parâmetros antioxidantes Os antioxidantes desempenham um papel importante na defesa contra o estresse oxidativo e os radicais livres, como os radicais superóxidos (O2−), hidroxil (OH ·) e peróxido de hidrogênio (H2O2) .30) Os antioxidantes endógenos estão catalisando esses radicais livres para  forma tóxica.

 SOD
 Os radicais superóxido são o agente oxidante preliminar que foi catalisado pela enzima SOD.  A conversão do reagente NBT de cor amarela foi transformada em cristais de formazan por reação com radicais superóxido.34) O SOD inibirá a conversão do NBT, portanto, encontramos a menor formação de cristais na quercetina (10, 50 e 100μg / mL),  embora o ácido gálico seja moderadamente menos tóxico, desencadeia a formação de superóxido.  Assim, a intensidade é maior em 10 a 200μg / mL de ácido gálico, enquanto na curcumina é muito sensível na indução de toxicidade e a formação de formazan também é alta em toda a concentração.  O aumento significativo da absorvância foi observado no tratamento com quercetina e ácido gálico.  Enquanto uma diminuição significativa foi observada no tratamento com curcumina com peixe-zebra representado nas Figs.  2a, b e c.

 GATO
 Após o processamento do SOD, os radicais de peróxido de hidrogênio serão maiores.  Ele deve ser convertido em uma forma não tóxica de H2O e O2 pela enzima endógena CAT.  Aqui, os gráficos inferem que há mais atividade enzimática no controle em comparação com as amostras de teste para quercetina, ácido gálico e curcumina.  Assim, ao realizar este ensaio antioxidante, afirma claramente que o nível de enzima CAT aumentou significativamente a exposição à quercetina e ao ácido gálico, enquanto na curcumina o CAT aumentou significativamente também diminuiu, devido à deterioração da defesa antioxidante contra a curcumina (Figs.

 1972 Biol.  Pharm.  Touro.  Vol.  42, n ° 12 (2019)
  Fig. 2. Os níveis de superóxido dismutase e catalase no homogeneizado de peixes tratados
 Os valores de OD obtaína representados como média ± DP.  [*, **, *** indica o aumento gradual, com o de controle em p <0,05.]
 2d – f).

 GSH reduzido
 GSH é o único tipo de ensaio antioxidante em que o
 A enzima GSH redutase catalisa a conversão do di-sulfureto de GSH em GSH reduzido.  GSH reduzido protege do estresse oxidativo.  E a enzima GSH peroxidase e GSH redutase utilizam o GSH para manter a homeostase normal.35) O relatório anterior usando a toxicidade hepática mediada por nanopartículas de prata (AgNPs) em peixe-zebra adulto mostrou como a concentração dos AgNPs (120 mg / L) aumenta, o nível de GSH aumenta  aumenta para controlar o estresse oxidativo.36) Foi comparativamente semelhante o caso de quercetina e ácido gálico.  Enquanto no caso da curcumina tem mais toxicidade, mesmo na dose mais baixa, o conteúdo de GSH parece ser maior e diminui significativamente à medida que a concentração de curcumina aumenta.  Isso ocorreu devido ao conteúdo endógeno inadequado de GSH à medida que o estresse oxidativo aumenta.  Após o período de incubação, o conteúdo de GSH foi estimado juntamente com o controle.  A quercetina aumenta significativamente
 a concentração de GSH quando comparada com outros compostos (Fig. 3).
 Testes Bioquímicos
 Teste de peroxidação lipídica
 MDA é um dos peróxidos lipídicos formados quando tratados com compostos;  quercetina, ácido gálico e curcumina em diferentes concentrações.  Os resultados indicaram que, quando a concentração de compostos aumentou gradualmente de (10 a 500), o peixe-zebra acumulou os compostos e produziu maiores concentrações de MDA.37) O aumento significativo no conteúdo de MDA após a exposição de quercetina, ácido gálico e curcumina  foram observados e representados na figura 4.
 O conteúdo do MDA é um biomarcador amplamente utilizado para a oxidação lipídica de ácidos graxos devido à sua reação com o TBA.  O teste de TBA baseia-se na reação do TBA em relação ao MDA para produzir uma cor vermelha fluorescente e foi usado anteriormente por químicos em alimentos para avaliar a degradação autoxidativa de gorduras e óleos.37) Em nosso experimento, a curcumina era mais tóxica do que a

 Vol.  42, n ° 12 (2019) Biol.  Pharm.  Touro.  1973
  Fig. 3. O conteúdo total reduzido de glutationa obtido em diferentes concentrações de compostos selecionados (a - quercetina; b - ácido gálico ec - curcumina) foi determinado
 Dados representados como média ± DP.  [*, **, *** indica o aumento gradual da diferença significativa com o controle em p <0,05.]
 Fig. 4. A estimativa dos níveis de proteína foi obtida para diferentes concentrações de compostos selecionados (a - quercetina, b - ácido gálico ec - curcumina) e seus dados foram representados como média ± DP.
 [*, **, *** indica o aumento gradual da diferença significativa com o controle em p <0,05.]
  outros compostos e o conteúdo observado de MDA em uma dose mais alta de curcumina mostraram 187,39 ± 0,57 ng / mL.

 Estimação de proteínas
 O conteúdo de proteínas foi estimado para caracterizar o efeito de cada medicamento separadamente.  Com o aumento da concentração.
 Na administração do medicamento, houve um declínio gradual no conteúdo de proteínas, que descreveu o efeito variável de cada medicamento nas larvas de peixe-zebra sob diferentes concentrações.
 A estimativa de proteínas pelo método de Bradford é o experimento altamente utilizado na estimativa de proteínas devido à sua sensibilidade e

 1974 Biol.  Pharm.  Touro.  Vol.  42, n ° 12 (2019)
  Fig. 5. A estimativa dos níveis de proteína foi obtida para diferentes concentrações de compostos selecionados (a - quercetina, b - ácido gálico ec - curcumina) e seus dados foram representados como média ± DP.
 [*, **, *** indica o aumento gradual da diferença significativa com o controle em p <0,05.]
 Fig. 6. A anormalidade morfológica foi observada em concentrações mais altas de compostos selecionados e focalizada sob o microscópio de luz (4 ×)
 A coluna "a" representa o controle seguido por "b-e" diferentes concentrações de compostos selecionados.  [SC, curvatura da coluna vertebral;  Dh, eclosão tardia e EP, edema pericárdico]
  mais preciso que o método de Lowry.38) Em apoio ao experimento acima de tudo, o conteúdo de proteínas também foi reduzido significativamente à medida que a concentração aumenta (Fig. 5).

 Deformação Morfológica Após a avaliação da toxicidade com diferentes concentrações, foram observadas anormalidades morfológicas e variações anatômicas em

 Vol.  42, n ° 12 (2019) Biol.  Pharm.  Touro.  1975
 72hpf.  Entre os três compostos, a curcumina elevou mais deformidades estruturais (Fig. 6), mesmo em menor concentração (5μg / mL) e as anormalidades, como curvatura espinhal (SC) e edema pericárdico (PE), aumentaram relativamente na concentração de 100μg / mL  mL.  A razão por trás da toxicidade da curcumina foi anteriormente relatada como;  induziu a apoptose dependente da caspase-3 em células Jurkat humanas.39) O ácido gálico mostra PE e retardo de incubação (Dh) no tratamento a 200μg / mL, enquanto a quercetina mostrou anormalidades pericárdicas em concentrações mais altas (500μg / mL).
 No relatório anterior, a curcumina mostrou o desenvolvimento
 defeitos como caudas dobradas ou em forma de gancho, curvatura da coluna vertebral, edema no saco pericárdico, reabsorção retardada do saco vitelino, e menor comprimento corporal.32) Foi relatado que a quercetina mostrava as alterações morfológicas, incluindo curvatura do corpo levar o eixo a causar diminuição do desempenho locomotor.  isso foi  também afirmou que a quercetina em maior concentração afetava a Produção de ATP.  Assim, o comportamento larval foi afetado por causar

 40) locomoção.

 Em nosso estudo, a toxicidade aguda desses compostos para este modelo foi previamente avaliada.  Também ajuda a prevenir a angiogênese, inibindo a rede mediada pelo VEGFR2.34) Portanto, pode ser uma substância promissora para a atividade anticâncer.  O ácido gálico, uma substância importante presente nas frutas e vegetais, a catequina é um dos derivados.

 CONCLUSÃO
 Das três drogas usadas para estimar a atividade tóxica das larvas de peixe-zebra, concluímos que a quercetina é menos tóxica que as outras duas drogas e foi confirmada usando ensaios bioquímicos, que proporcionaram menor atividade de peroxidação lipídica e maior teor de proteínas com um  Valor de LD50, que proporcionou maior taxa de sobrevivência para o medicamento com quercetina.
 Conflito de interesse Os autores declaram não haver conflito de interesse.

 REFERÊNCIAS
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Autores:

 Rajendran Harishkumar, Lakki Pramod Kumar Reddy, Shivam H. Karadkar, Musa Al Murad, Saravanan Sibi Karthik, Saravanan Manigandan, † Chinnadurai Immanuel Selvaraj e JohnSamuel Godwin Christopher *, um
 uma Escola de Biociências e Tecnologia (SBST), Vellore Institute of Technology (VIT);  Vellore-632014, Índia: eb escola VIT de Inovações e Aprendizagem Avançada em Agricultura (VAIAL), Vellore Institute of Technology (VIT);  Vellore-632014, Índia.
 Recebido em 4 de abril de 2019;  aceito em 19 de setembro de 2019 

O futebol, paixão nacional, alavanca a campanha contra o câncer, Driblando o Câncer

 
No próximo dia 15 de dezembro, domingo, no Parque São Jorge, a campanha nacional de combate ao câncer, DRIBLANDO O CÂNCER, utiliza a maior paixão do brasileiro, o futebol, para sensibilizar a opinião pública sobre o câncer
O Parque São Jorge, conhecido como Fazendinha, recebe no próximo domingo, dia 15 de dezembro, a partir das 14h00, o jogo de futebol solidário e de celebridades, que objetiva mobilizar a sociedade civil organizada por uma grande causa, a luta contra o câncer.
Segundo Maria de Lurdes Silva do Nascimento, presidente da GAMA – Grupo de Amparo Momento de Amar (uma das 20 ONGs conectadas ao projeto) - a campanha pretende mudar os graves números do câncer no país, que hoje atinge, por ano, 600 mil brasileiros segundo o Instituto Nacional do Câncer e mata mais de 200 mil. “Driblando o câncer foca sua luta em quatro pilares: prevenção, diagnóstico precoce, acesso ao SUS e priorização do câncer nas políticas públicas”,destaca.
Clarisia Ramos, da UNACCAM - União de Apoio e Combate ao Câncer de Mama, informa que o grande problema hoje no país é a falta de acesso ao SUS. ”Pacientes ficam 11 meses para conseguir uma biópsia e Leis que pretendem determinar prazos de atendimento não são obedecidas”, revela.

O evento usa a força do futebol
O realizador do evento, Gil Santos, da Craques Master, acredita que usar a paixão do brasileiro pelo futebol consiste em uma estratégia muito eficiente para sensibilizar a sociedade.
Ele explica que o evento consiste de dois jogos principais: o jogo de futebol feminino e o jogo de futebol masculino. No jogo feminino participam Mary Alexandre; a Musa do Palmeiras, Daniele Oliveira; a Miss Bumbum World 2019, Suzy Cortez; a Miss Tattoo Week 2019, Brenda Bubulla; a jurada do Gugu, atriz e modelo Cris Piza; a apresentadora da NGT TV , Priscila Sá; e sete jogadoras do time oficial da Escola do Bolinha Futebol Clube, de Manaus, que incluem índias do Amazonas. Foram convidadas ainda Jojo Todynho, Helen Ganzarolli, Glória Groove, entre outras famosas. O jogo feminino está sendo coordenado pela empresária e influencer, Adriana Restum, da Planet Girl.
No jogo masculino estarão presentes Cafu (pentacampeão), Ronaldo (tetracampeão), Amaral (seleção), Jamelli (seleção brasileira), Viola (pentacampeão), Ademir da Guia (Divino), Zenon (Corinthians), Luizão, Júnior (pentacampeão), goleiro Gilmar, Careca, BiroBiro, Gustavo Nery, Pavão, Zé Carlos (seleção), Diney (Corinthians), César Sampaio (seleção), Alexandre Rosa (Palmeiras), Tonhão (Palmeiras), Fabiano Rodrigues (Fenerbahçe), Ademar (Stuttgart-Alemanha), Somália (Fluminense), Elivelton (Seleção), Alexandre Alves (São Paulo), Derval (Santos), Leandrinho (São Paulo) e Rogerinho (Corinthians), entre outros famosos. Ainda compõe o time Dadá Maravilha, o quarto maior artilheiro do futebol brasileiro, ícone do esporte no Brasil e no mundo.
Somam-se aos jogos, apresentação de shows, desfile de bateria de escola de samba, desfile das ONGs e a participação de diversos institutos e organizações sociais, como o Instituto Patricia Medrado, com a presença da própria tenista e de 45 crianças do Instituto. Também comparecem várias representações de outras modalidades de esportes do Corinthians como o time do futebol americano, que comparece uniformizado.
O tatuador e grafiteiro Markone, um grande corinthiano, escolheu apoiar o evento com sua paixão: o grafite. O artista, muito conhecido pela sua arte na estação de metrô Corinthians/Itaquera, entrará em campo para desenhar ao vivo, em 10 metros de uma tela, um grafite em homenagem ao Driblando o Câncer. A conceituada oncologista Nise Yamaguchi dará o primeiro chute contra o câncer na partida.

Os números do futebol
Segundo pesquisa feita pela Fundação Getúlio Vargas, o futebol movimenta R$ 16 bilhões por ano, tendo 30 milhões de praticantes (aproximadamente 16% da população total), 800 clubes profissionais, 13 mil times amadores e 11 mil atletas federados. 
Em 2018, um estudo realizado pelo Centro Internacional de Estudos Esportivos (CIES Football Observatory) revelou que o Brasil era o maior exportador de futebolistas no mundo, com mais de 1.200 brasileiros jogando fora de seu país de origem.

A história do futebol
O futebol chegou ao Brasil pelas mãos de um brasileiro chamado Charles Miller, que durante uma viagem a Inglaterra, trouxe duas bolas ao país e um conjunto de regras.
No início, o futebol era praticado apenas por pessoas da elite, sendo vedada a participação de negros em times de futebol. Os negros só passaram a ser aceitos no futebol em 1920. No período correspondente ao Governo Vargas, o futebol cresceu com o incentivo do governo e surgiram grandes atletas como Garrincha, Pelé, Zagallo, Djalma Santos, Nílton Santos e Bellini entre outros. “A malandragem, a ginga e a agilidade do jogador brasileiro definiram o novo modo de ser brasileiro e ajudaram a formar uma identidade nacional”, diz Gil Santos, da Craques Master.
DRIBLANDO O CÂNCER usa a força motriz do futebol para mobilizar a sociedade. “Se nada for feito, o câncer será a primeira causa de morte até 2030, superando as doenças cardiovasculares”, alerta Gilberto de Castro, oncologista e professor da Faculdade de Medicina da USP.
Promovendo debates e simpósios para fomentar o debate sobre o câncer no país, DRIBLANDO O CÂNCER trará o maior jogo de futebol da história de São Paulo, unindo a filantropia ao futebol.
“Pretendemos por meio da conscientização pública, do debate e da mobilização nacional mudar os números do câncer no Brasil. Dar de goleada contra essa doença. Para isso, precisamos do apoio de todos vocês”, destaca Denise Blaques, diretora institucional do Instituto Lado a Lado pela Vida.

quarta-feira, 27 de novembro de 2019

Revezes do trabalhador: Justiça do Trabalho de Minas valida contrato de trabalho intermitente sem contraprestação



A trabalhadora não foi convocada para trabalhar e, por isso, nada recebeu da contratante.

O juiz David Rocha Koch Torres, na titularidade da Vara do Trabalho de Ubá, julgou improcedentes os pedidos de uma trabalhadora contratada por uma rede varejista de eletrônicos e móveis para exercer a função de gerente de loja. As partes celebraram contrato de trabalho intermitente, novidade trazida pela Lei nº 13.467/17, conhecida como reforma trabalhista. No entanto, o julgador não encontrou nada de errado no ajuste feito, concluindo que a empresa cumpriu todas as formalidades da lei para essa forma de contratação.

Na reclamação, a trabalhadora contou que nunca foi chamada para trabalhar, permanecendo à disposição da ré. Segundo ela, o contrato de experiência não foi anotado na carteira, razão pela qual pretendia obter a declaração da rescisão do contrato de trabalho por prazo indeterminado, com recolhimento do FGTS e recebimento da parcela devida. Em defesa, a empresa sustentou que a contratação intermitente foi devidamente observada.

O magistrado deu razão à varejista. Ele explicou que o artigo 443, parágrafo 3º , da CLT, incluído pela Lei nº 13.467/2017, considera como intermitente o contrato de trabalho no qual a prestação de serviços, com subordinação, não é contínua, ocorrendo com alternância de períodos de prestação de serviços e de inatividade, determinados em horas, dias ou meses, independentemente do tipo de atividade do empregado e do empregador. Há exceção para os aeronautas, regidos por legislação própria.

Sobre o tema, apontou que o artigo 452-A da CLT determina que o contrato em questão seja celebrado por escrito e contenha especificamente o valor da hora de trabalho, que não pode ser inferior ao valor horário do salário mínimo ou àquele devido aos demais empregados do estabelecimento que exerçam a mesma função em contrato intermitente ou não.

Por meio dessa modalidade contratual, empregado e empregador firmam pacto em que inexiste garantia de salário ou de número de horas trabalhadas. De acordo com o magistrado, a relação é marcada pela imprevisibilidade e incerteza da necessidade do serviço do trabalhador intermitente. O parágrafo 5º do artigo 452-A da CLT esclarece que os períodos intercalares sem atividade são desconsiderados como tempo à disposição do empregador. Ou seja, não têm qualquer correlação com o contrato de trabalho. Ademais, o próprio dispositivo legal autoriza a mistura contratual. Desse modo, o trabalhador intermitente pode firmar simultâneos pactos com outros empregadores, conforme previsão contida no parágrafo 5º.

No caso, o magistrado verificou que as partes firmaram contrato por escrito, do qual consta o valor do salário-hora e a advertência de que o período de inatividade não seria considerado tempo à disposição do empregador. Foi prevista a possibilidade de a trabalhadora prestar serviços a outros contratantes.

Diante desse contexto, o julgador reconheceu que as formalidades legais foram observadas, nada sendo devido à autora. Chamou a atenção para o fato de não ter havido impugnação específica ao contrato de trabalho anexado aos autos, tampouco à assinatura da empregada registrada no documento. Ele não encontrou qualquer indício de vício de consentimento na assinatura e aceitação dos termos contratuais pela empregada. Ao contrário, a própria trabalhadora admitiu, em audiência, ter assinado o contrato intermitente e o TRCT anexados aos autos pela ré. Isso demonstra que ela tinha ciência inequívoca das especificidades contratuais.

Nesse contexto, o juiz considerou que o fato de a empregada não ter sido convocada a trabalhar não é capaz de surtir qualquer efeito, enquadrando-se a conduta no poder diretivo do empregador. Como não houve a prestação de serviços, não havia contraprestação a ser reconhecida, tampouco FGTS a ser recolhido. Aqui esclareceu que o FGTS somente seria devido com base nos valores pagos no período mensal (parágrafo 8º do artigo 452-A, da CLT), o que não existiu no caso. O mesmo raciocínio foi adotado com relação ao aviso prévio. “Se não houve prestação de serviços, inexiste média de valores recebidos, não se cogitando, pois, em pagamento de indenização do aviso prévio”, destacou o juiz, reportando-se à regulamentação do artigo 5º da Portaria do MTE nº 349/2018 (mesma inteligência que constava do artigo 452-E, 'a', da CLT, introduzido pela Medida Provisória 808/2017, vigente na época da celebração do contrato firmado entre as partes).

Por fim, o julgador considerou que o aviso-prévio não seria mesmo devido, uma vez que, no TRCT apresentado nos autos, constou que a ex-empregada pediu demissão. Por tudo isso, julgou improcedentes os pedidos, sendo a decisão posteriormente confirmada pelo TRT de Minas.

Processo PJe: 0010201-41.2019.5.03.0078 — Data de Assinatura:11/04/2019

Notebook Lenovo, ruim de câmara e som, para totalmente e Carrefour não repõe novo

O Consumidor no Brasil está desamparado. Na compra de notebook Lenovo vai ser o exemplo para comprovar esse desamparo. Com toda certeza a pessoa que vai na Loja, nesse caso, Carrefour do Shopping Bulevar em Minas Gerais, pago à vista com cartão, quer notebook bom e que funcione perfeitamente, tudo que ele comprou. E, ainda está na garantia, acertada de 12 meses.


Não é isso que o Carrefour entregou nessa venda. Na bancada de experimento o vendedor disse que o Lenvo demorava um pouco para abrir, quando se está avaliando há coisas que passam desapercebidas. Mas, tudo indica que o notebook que o consumidor levou foi o de exposição ou refugo de estoque. 

Durante o uso desse Lenovo, última geração com valor de R$ 2.648,00, 8gb, 1 terabytes de HD, sonho de consumo de muita gente, inclusive quem gosta de jogos. A câmara de fotos deste aparelho, acredito, é muito ruim, toda embçada, desfoca a imagem e a granula, chega a mudar a cor da camisa da pessoa.
Então já temos dois defeitos. O terceiro é o som, super baixo, não chega nem a ser som de ambiente. Colocado no máximo ele não se sobressai, muito baixo mesmo.

Por último, o maior defeito, isso no aparelho, simplesmente parou de funcionar. Abre a imagem, aparece a logomarca da Lenovo e depois não abre mais programa e arquivo algum. O que isso quer dizer, somente o técnico em informática.

Ora, não tem nem dois meses de uso o notebook, novinho. Mesmo assim é preciso chamar o técnico especialista para ver o que aconteceu. Este vem, tem de pagar em média R$ 150,00e começa a testar tudo quanto o seu conhecimento em aparelho notebook lhe permite. Por fim o aparelho começa a negar todos os acessos e verificações como também configurações. O técnico então argumente que é o HD em 80% de sua avaliação é o HD, para deixar mais esclarecido, precisaria abrir, mas se ele fizer isso, como é conhecido de todos, perde a garantia por violação, alguns aparelhos há até selos.

Bom, único recurso voltar até a loja do Carrefour e reclamar e pedir outro aparelho de reposição, pois não está funcionando, em nada e funcionava precariamente conforme descrevi. 
Qual a surpresa, ao chegar na loja o vendedor Carlos atende muito mal e logo descarta para atender outras pessoas que estavam vendo outros produtos lá atrás. Não compram nada e ai ele vem atender e informa de pronto: Não trocamos nada, somente em 48 horas se der defeito, como o seu.

Sob argumento de que o aparelho era novo, comprado à vista com cartão de crédito e que usava para trabalhar em comunicação, o proprietário é jornalista e editor. Ele começou a andar e disse que iria pegar número de telefone e foi para outro setor. Neste ele encontrou uma senhora e começou a atender essa senhora e somente depois ele volta com o tal número. 

Este número quando contatado pela segunda vez informaram que era da Assistência técnica da Motorola-Lenovo, foi informado para a atendente que era notebook Lenovo comprado no Carrefou e que eles tinham indicado. Passou o endereço na av. Amazonas, 100 e quando chegaram lá com o notebook, mais fila, mais demora. Ao ser atendido pediram o aparelho e quando foi entregue o notebook não quiseram receber e disseram, a supervisora e gerente da loja, duas funções, não consertavam notebook, somente celular.

Outro número de telefone What Sapp furado, pois informaram errado, precisava do DDD 011, somente quando se descobriu isso foi feito contato com a empresa Lenovo em São Paulo, através de  interurbano, onde a atendente e também técnica em aparelho celular exigiu que pegasse agulha e abrisse a bio do aparelho e começou a indicar vários testes e todos a mesma coisa, enfim ela repetiu e fez o dono do aparelho de boco de mola. Não conseguiu e afirmou com a informação que passaram para ela de que era o HD, disse que não era, porque numero do HD estava a aparecer na bio.

Conclusão, o jornalista perdeu todos os seus dados, editoração de revista mensal Jornal de Saúde digital, vários anúncios editados, prontos e mais de 40% de diagramação da revista que como é mensal tinha data de fechamento para no máximo 30/11/2019. Tudo isso foi informado para a atendente e essa disse que mandaria código dos Correios e que no email vinha a autorização de abrir e copiar os dados, uma vez que os técnicos de sua empresa não o fariam. Foi comentado do valor que tinha que ser pago ao técnico e  sua resposta foi lacônica: quem paga é o dono do aparelho.

Quando apresentado ao técnico o email, este não quis abrir o aparelho e retirar o HD e tentar salvar os dados, fazer o Back up, e reafirmou e ainda concedeu laudo que se abrisse o equipamento, mesmo com o email,que autorizava, mas nao claramente que se abrisse com total responsabilidade da Lenovo, pelo contrário, tinha ressalvas que não podia trocar peças e nem avariar.

Em resumo, todo o mês do jornalista de trabalho e outros arquivos e imagens se perderam. E, o notebook foi embalado e enviado para São Paulo, com o compromisso de que em 7 dias a 21 dias estaria de volta, não se fala em aparelho novo, que é o correto e tampouco a devolução do dinheiro visto que o aparelho é ruim no som e na câmara de fotografias e para abrir, talvez devido ao Windows 10, que ainda está sendo estudado e é muito ruim, também. Parece que vão consertar e mandar o aparelho, agora ao meu ver e critério de segunda mão, não é mais aparelho comprado e ainda novo, apresentou defeitos de fabricação.

O motivo dessa historinha toda é que a legislação protege essa empresas "picaretas", isso mesmo, a pessoa compra certo objeto novo, vem com defeitos de fábrica, estraga em sua mão, pois todos sabem que há certo tipo de indústria que constroem as coisas para funcionar por determinado período e depois a coisa para de funcionar mesmo. Esse aparelho se era de exposição, ou refugo de loja,pode muito bem estar nessa classificação. Mesmo assim a legislação protege esse tipo de empresa.

Já para a indenização do jornalista ou da pessoa lesada em seu direito, pense bem, precisa provar o prejuízo, o mal funcionamento e paralisação total do aparelho, não são suficientes para indenização. Ora, o que isso parece, é quase o mesmo que alguém lhe furtar a carteira ou roubar-lhe R$ 2.648,00, em comparação, grosseira obviamente. Pois, no final a pessoa fica sem o notebook em questão por vários dias e ainda terá aparelho de segunda mal e com som e câmara ruins.

No Brasil, o Consumidor teve grande vitória com o Código de Defesa ao Consumidor, no entanto, a Lei 9.099/95 que regula os juizados especiais e a Lei de Comércio, ainda protege o industrial, e outros, como o prestador de serviços, que pode fazer toda a sorte de serviços ruins e ainda ficar ileso, sem penalidade alguma  que sirva de lição e reflexão para que não repita outro deslize ou esperteza contra a pecúnia alheia.

Marcelo dos Santos - jornalista profissional

Jornal de Saúde informa

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